상대적이고 정확한 분자량 결정 방법 – Inventive Proteomics Weblog

분자량은 유기 화합물의 기본적인 물리화학적 특성이며 화합물의 화학식에서 개별 원자의 상대 원자 질량의 합입니다. 정확한 분자량은 종종 측정된 유기 화합물 및 생물학적 거대분자의 정확한 구조를 나타냅니다. 분자량은 다당류, 펩타이드, 단백질 등을 식별하는 주요 매개변수입니다.

분자량 측정에는 상대 분자량 측정과 정확한 분자량 측정의 두 가지 주요 유형이 있습니다. 일반적인 측정 방법에는 겔 투과 크로마토그래피(GPC), 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 질량 분석법, SDS-PAGE 등이 있습니다.

상대 분자량 결정

다당류 및 펩타이드의 상대적 분자량은 일반적으로 겔 투과 크로마토그래피(GPC) 또는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여 결정됩니다. 이 방법은 평균 분자량 값뿐만 아니라 폴리머 샘플의 분자량 분포에 대한 정보도 제공합니다. 또한 다른 검출기(예: 광산란 또는 점도 검출기)와 결합하여 용액 내 분자의 구조 및 크기에 대한 정보를 제공할 수 있습니다.

SDS-PAGE 방법을 사용하여 단백질 및 펩타이드의 상대적 분자량을 결정할 수도 있습니다. 원리는 전기영동 시스템에 SDS를 첨가하면 단백질의 수소결합과 소수성 결합이 열리고 단백질 분자와 결합하여 전기영동 이동도가 분자 크기에만 의존하게 된다는 것이다. 따라서 미지의 분자량은 표준단백질의 분자량과 이동도를 대수로 만든 표준곡선으로부터 구할 수 있다.

정확한 분자량 결정

단백질, 펩타이드, 아미노산, 당단백질 및 기타 화합물의 정확한 분자량은 일반적으로 질량 분석법으로 결정됩니다. 펩타이드 매핑과 결합된 질량분석법 분자량 분석은 올바른 아미노산 서열을 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이것은 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화 비행 시간 질량 분석법 테스트 또는 다른 고해상도 액체 질량을 사용한 전체 스캔 획득으로 수행할 수 있으며, 그런 다음 디콘볼루션 소프트웨어를 사용하여 측정합니다.

Inventive Proteomics는 제약 및 과학 사용자에게 전문적이고 신뢰할 수 있는 분자량 결정 서비스를 제공하기 위해 숙련된 전문가 팀과 첨단 장비를 보유하고 있습니다.

상대 분자량 측정 요구 사항을 위해 Inventive Proteomics는 액체 크로마토그래프를 통해 GPC 컬럼 및 SEC 컬럼 분리, UV 검출기, 차등 검출기, 광산란 검출기, 점도 검출기 및 GPC 소프트웨어 분석을 제공합니다. 또한 전기영동 장치가 장착되어 있으며 다당류, 펩타이드 및 단백질의 상대 분자량 측정을 위한 샌드위치형 수직판 전기영동 탱크와 박막 전기영동 탱크가 장착되어 있습니다.

을 위한 정확한 분자량 결정 필요에 따라 Inventive Proteomics에는 Orbitrap 검출기가 있는 고해상도 질량 분석기 Q Exactive HF와 deconvolution 소프트웨어 BioPharma Finder에 의한 deconvolution이 장착되어 있어 단백질, 펩타이드, 아미노산, 당단백질 등의 정확한 분자량 측정이 가능합니다. 정밀도는 1에 이릅니다. 겔 투과 크로마토그래피(GPC) 및 SDS-PAGE와 같은 기존 측정 방법에 비해 정확도를 크게 향상시키고 단백질 특성화 및 단백질 변형 분석 요구를 충족할 수 있는 Da.

정확한 분자량 측정을 위한 LC-MS 방법^[1]

참조

[1]

Lippens, JL, Egea, PF 등. (2018). 멤브레인 및 소수성 단백질의 정확한 분자량 측정을 위한 고속 LC-MS 방법. 분석 화학, 90(22), 13616-13623.